- 以下建議根據實驗需求及引子長度決定適當的純化方式。
純化方式 |
說明 |
建議長度* |
純度 |
典型應用實驗 |
PG Primer
(Desalt 不附圖) |
以 G-25 膠體過濾法移除合成過程產生的副產物 (無機鹽類),無法移除合成失敗的序列。 |
< 35 mer |
合成效率 98.5% |
一般 PCR
1 OD 約可使用 1000 次 |
Desalt
(附 PAGE 圖) |
< 50 mer |
合成效率 99% |
一般 PCR
<30 mer 可用於 cloning |
OPC |
OPC (Oligonucleotide Purification Catridge) 管柱純化利用疏水性不同的原理,來分離序列正確及合成失敗的短鏈引子。 |
< 60 mer |
<25 mer: 85%
<35 mer: 80%
<60 mer: 75% |
30 mer 以上 cloning 實驗
定序用引子 |
HPLC
Dual-HPLC |
以 IP-RP HPLC 分離疏水性不同的引子。Dual-HPLC 為兩次 HPLC 純化,可以更提高產品純度 |
< 80 mer |
<50 mer: 95%
<80 mer: 90% |
基因合成
RNAi cloning
Mutagenesis
螢光修飾、Biotin、Thiol 等特殊修飾 |
PAGE |
以切膠的方式分離出合成的主要產物,建議使用於長鏈引子純化。小片段引子 (<40 mer 效果不佳) |
>81 mer |
95% |
長片段 cloning 實驗
基因合成 |
訂單長度若超過建議長度,品管標準可能無法滿足客戶的實驗需求。可能因產品純度不足導致發生 cloning 後序列錯誤或缺失。
合成效率(Coupling Efficiency)與產品純度(Purity)的關係
合成效率為每一個鹼基鍵結時反應步驟的完成比例。
純度為正確序列的引子比例。
100 個分子中,若有 99 個分子成功形成磷酸二脂鍵 (phosphodiester bond) 共價鍵結,則合成效率為 99%。合成效率 99% 時若僅以 Desalt 純化,在合成 20 個 mer 後, 正確序列的引子比例為 0.9919 = 83%。合成效率與合成原料的活性與純度有關。百力選用高品質、品管良好之國外原廠原料以確保合成引子之品質。即使如此,由於化學反應的特性,合成效率無法達到 100%,合成產物純度會因為每一合成批次的合成效率而有不同。此時若您的實驗要求較高純度的引子時,我們建議您訂購進一步純化的引子。
以下為 Desalt 引子出貨之品管標準 (合成效率為 99%)。本資訊僅限一般序列,特殊序列 (polymer, repeat 等) 請聯絡我們詢問品管標準。
Length |
Purity |
Note: |
20 mers |
83% |
Purity is defined as the percent full length product, assuming the coupling efficiency of 99%. |
30 mers |
75% |
40 mers |
68% |
50 mers |
64% |