> KOD -Plus- > KOD -Plus- Neo
產品特點
l 最快速聚合速率
KOD 是目前已知聚合速率最高的 PCR 酵素，在最短的時間內，可以得到最多的產量。
l 超級耐熱性
經過 100℃、1小時的熱處理後仍可保持约70％的活性；95 ℃半衰期可達 12 hr。Denature 溫度最高 98 ℃, 30 sec, 30 cycles，可克服 DNA 模板的二級結構，不需外加 DMSO！
l 無可匹敵的校正能力
KOD 的正確率為一般 Taq 的 50 倍，而KOD plus 正確率更可達 Taq 的 82 倍，為 Pfu 的 14 倍。
l KOD 兼具強大校正能力以及最快速聚合速率之特性，最適合對正確率高要求的 cloning 實驗，特別推薦應用於 site-directed mutagenesis。
各種酵素耐熱性與聚合效率之比較
KOD 於加熱 12 小時後仍保留 50% 活性 (half-life period)，耐熱性為 pfu 的 2 倍，為 Taq 的 8倍。KOD 的聚合效率為 pfu 的 5 倍以上。酵素具高耐熱性，可以提高 PCR 反應時的變性溫度，以克服模板二級結構的問題。
相較於其他具 proofreading 活性 (校正能力) 之 PCR 酵素，KOD -Plus- 具最高校正能力。為 Taq 的 82 倍，pfu 的 14 倍。最適合要求高正確率的 cloning 實驗。
l KOD -Plus- 正確率可達 Taq 的 82 倍，為 Pfu 的 14 倍。
l 加入了 KOD 抗體，以提供 hot-start 功能，減少非專一性反應以及 primer-dimer 形成。建議使用於 long PCR cloning。
l 最大放大長度: 21 kb from lambda phage DNA, 12 kb from human genomic DNA, and 7 kb from cDNA.
l KOD -Plus- 具高校正能力與高耐熱性，最適於用於長片段之 cloning。針對 GC 值高模板，可於 PCR 時提高變性溫度到 98 ℃以解開雙股模板。
l KOD -Plus- 之 PCR 產物為平頭端，建議使用專用之 TA cloning kit (TArget clone -Plus-) 或者純化 PCR 產物後以 Taq 做尾端 A 延伸反應。
訂購資訊
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品號
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品名
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規格
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最大放大片段
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典型應用實驗
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KOD -Plus
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200U
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21kb
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適用 GC-rich template、
Site-directed mutagenesis
最高的校正能力 (Taq 的 82 倍正確率)
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² 包裝成份
KOD -Plus-(1.0U/µl)* 200 µl × 1
10× Buffer for KOD -Plus- 1.0 ml× 1
25 mM MgSO4 1.0 ml × 1
2 mM dNTPs 1.0 ml × 1
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² 建議模板濃度
Genomic DNA 10~200 ng/50 µl
Plasmid DNA 1~50 ng/50 µl
cDNA ~100 ng (RNA equiv.)/50 µl
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使用注意事項
1. 酵素以抗體抑制活性，Cycling 前須以 94℃ 加熱 2 分鐘以活化酵素活性
2. KOD 系列酵素最適反應溫度為 68℃，denature 溫度最高可達 98℃ 10 sec, 30 cycles
3. RT-PCR 反應時，過量的 RNA 會抑制酵素活性，建議 RNA 量不要高過 100 ng/50 ml
4. 可添加 DMSO 以增加高 GC 值模版之放大效率，濃度 2.5%-5% 不會影響酵素校正能力
5. PCR 產物為平端 (blunting end)，TA cloning 前須以 Taq 做 A-tailing。
推薦使用 KOD -Plus- 專用之TA cloning kit (TArget clone -Plus-, TY-TAK-201)
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操作實例
1. 適用於高 GC 值之 DNA 模版 (70%)
使用 KOD plus，不需調整 buffer 成分，可以放大 GC rich template，產量比 Taq + DMSO 更多。
2. PCR 片段可達 21 kb
上圖以 phage 為模板，KOD -Plus- 可以放大 21 kb PCR 片段。
KOD -Plus- Neo 具最高正確性並可快速放大，長片段之 PCR 更省時！
l KOD -Plus- Neo 與 KOD -Plus- 具有相同的校正能力 (Taq 的 82 倍)，
KOD -Plus- Neo 含專利配方強化延伸能力，human gDNA 放大片段可達 24 kb
l 增強的 PCR 效率，可以縮短放大時間為 30 sec/kb，
放大 20 kb 片段時反應時間可縮短5 小時。
l 具高校正能力與高耐熱性，最適於用於長片段之 cloning。針對 GC 值高模板，可於 PCR 時提高變性溫度到 98 ℃以解開雙股模板。
l PCR 產物為平頭端，建議使用專用之 TA cloning kit (TArget clone -Plus-) 或者純化 PCR 產物後以 Taq 做尾端 A 延伸反應。
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