除了一般 PCR 引子外，我們提供以下常用特殊修飾引子。若您需要的修飾種類不在以下列表，請與我們連絡。

螢光修飾

應用：百力提供多樣的螢光標定選擇，並以 HPLC 純化保障樣品的純度，產品的應用範圍包括 sequencing、SNP、FISH 等。

修飾選擇：  5', 3'

各種螢光標定物質的吸收波與釋放波簡表：
以下僅列出常用的螢光標定劑的最大吸收及釋放波，若您有個別需求，請與我們連絡。

修飾種類	吸收波長 Max.	釋放波長Max.	位置
6-FAM , FITC	494 nm	520 nm	5'-, 3'-
FITC-dT	494 nm	520 nm	internal dT
TET	521 nm	541 nm	5'-
JOE	520 nm	548 nm	5'-; 3'-
Yakima Yellow	526 nm	548 nm	5'-
HEX	535 nm	553 nm	5'-
Cy3	547 nm	563 nm	5'-
TAMRA	555 nm	576 nm	5'-; 3'-
ROX	575 nm	602 nm	5'-; 3'-
Texas Red	595 nm	615 nm	5'-; 3'-
Cy5	646 nm	662 nm	5'-
Alexa Flour series	請詢問		5'-; 3'-
Quasar series	請詢問		5'-; 3'-

螢光分子的品管方法：
螢光標定引子經 HPLC 純化後，除了以 HPLC 確認純度外，也輔以 denaturing PAGE 確定分子大小，HPLC 儀器搭配的 photodiode array 可以偵測紫外光-可見光吸收光譜以確認螢光分子的種類。

• 螢光分子未染色前在 UV 光的激發下會釋放出特定的顏色，FAM 為綠光，HEX 為黃光，TAMRA 為紅光。

 

Upper: Fluorescent PAGE
Oligos with different fluorescent labeling were analyzed by denaturing PAGE. After electrophoresis, gel was excited by UV and photographed.
#1,3,5: HEX-oligos (yellow)
#2,4,6:FAM-labeled-oligos (green)
#7,8: TAMRA-oligos (orange)
Lower: PAGE stained with methylene blue.
M: oligo size markers.

紫外光-可見光吸收光譜圖，可鑑定螢光吸收光譜。不同的螢光物質會出現不同的圖譜。以下圖為例，應用於即時定量 PCR 之探針，左圖為 HEX-NFQ，在 535 nm 及 522 nm 出現最大吸收波，分別為 HEX 及 NFQ 之特性。若探針分子為FAM-TAMRA (右圖)，其吸收光譜會出現不同圖形，在 494 nm 出現 FAM 之最大吸收波。

 

定量 PCR 探針

其它非螢光修飾 常用非螢光修飾如下：

修飾種類 5'-	最大吸收波	最大釋放波	適用quencher
6-FAM	494 nm	520 nm	BHQ-1/Dabcyl/NFQ/TAMRA
JOE	520 nm	548 nm	BHQ-1/Dabcyl/NFQ/TAMRA
Yakima Yellow	526 nm	548 nm	BHQ-1/Dabcyl/NFQ/TAMRA
HEX	535 nm	553 nm	BHQ-1/Dabcyl/NFQ/TAMRA
Cy3	547 nm	563 nm	BHQ-2/Dabcyl/NFQ
TAMRA	555 nm	576 nm	BHQ-2/Dabcyl/NFQ
ROX	575 nm	602 nm	BHQ-2/NFQ
Texas Red	595 nm	615 nm	BHQ-2/NFQ
Cy5	646 nm	662 nm	BHQ-2/BHQ-3/NFQ

• 
  Quencher 有效吸收波長範圍
  TAMRA 本身可釋放出螢光，其它 quencher 為 dark quencher，不會釋放出螢光，使用 dark quencher 的探針可以有較低的背景值與較高的訊噪比 (S/N ratio)。
  

修飾種類	Effective absorbance range
BHQ-1	480-580 nm, Max= 534 nm
BHQ-2	550-650 nm, Max= 579 nm
BHQ-3	620-730 nm, Max= 680 nm
Dabcyl	400-500 nm, Max= 479 nm
NFQ	390-625 nm, Max= 522 nm
TAMRA	Ex= 555 nm, Em= 576 nm

其它非螢光修飾

以下為常用非螢光修飾，若您的需求不在以下列表中，請與我們聯繫。

修飾種類	位置	建議純化方式
Amino modifier	3', 5', internal dT	OPC/HPLC
Biotin	3', 5', internal-dT	HPLC
Biotin TEG	3', 5'	HPLC
Digoxigenin (DIG)	3', 5'	HPLC
Inosine	任意點位	OPC
Phosphorylation	3', 5'	OPC/HPLC
Thiol modifier	3', 5'	HPLC
Spacer, C3, C6, C12	3', 5', internal	OPC/HPLC

硫代修飾 (Phosphorothioate, S oligo)

將引子兩個鹼基間的磷酸二酯鍵其中的一個氧以硫取代後，可以保護該引子不被核酸水解酶分解，可提高引子的穩定度並延長作用時間。該種修飾之引子普遍應用於反義實驗以抑制基因表現 (antisense experiment)。修飾的方式為介於兩個鹼基間或位於端點，可選擇整條引子作修飾或指定於特定點位修飾。DNA/RNA 引子都可以加入硫代修飾。以下說明三種 phosphorothioate bond (PS) 的結構。

RNA oligo  

一般 RNA 產品規格如下

產量	限制	純化方式
2nmole	41~60 mer	僅 HPLC
5nmole	31~60mer	僅 HPLC
10 nmole	~60 mer	BioRP (免費) HPLC (加收純化費) 41 mer 以上建議 HPLC  純化
20 nmole
50 nmole
100 nmole

除了提供一般 RNA 合成外，我們提供各種特殊修飾如下列表，建議使用 HPLC 純化之產品以獲得最佳品質。

5'-修飾	5'-修飾	Internal 修飾
5' Fluorescein	3' Fluorescein	Phosphorothioate
5' Phosphorylation	3' Phosphorylation	2'-OMe
5' Biotin	3' Biotin	2'-F(U)
5' Amine	3' Amine	2'-F(C)
5' TAMRA	3' TAMRA	Inosine
5' Thiol	3' Thiol	Chimeric DNA
5' Cy3	3' DABCYL	Deoxy-abase
5' Cy5	3' Cholesterol
5' PEG 2000	3' PEG 2000

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陽性對照 基因選擇包括 GAPDH, GFP, Luciferase，抑制之抑制效率可達 90%
陰性對照修飾選擇：5'-Fluorescein

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