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PCR enzyme

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KOD FX 系列產品為 Native KOD 酵素經突變修飾後，減弱了校正能力但強化酵素耐熱性與延伸能力，PCR 成功率提高，最適於克服困難模版以及粗萃物直接操作 PCR。

l 適用於放大長片段產物
human gDNA 24 kb, phage 40 kb, cDNA 13.5 kb

l 克服 GC rich template
輕鬆完成 90% GC rich PCR 放大

l Direct PCR 成功率提高
crude sample、mouse tail lysate 不需萃取純化，可以直接進行 PCR 放大

l 校正能力約為 Taq 之 11 倍

品號	品名	規格	最大放大片段	典型應用實驗
TY-KFX-101	KOD FX	200U	40 kb	適用 GC-rich template (~90%)、可以克服最困難的 PCR 反應、最高 PCR 成功率可做長片段 PCR 放大 Crude sample 可以直接進行 PCR 反應正確率為 Taq 的 11 倍
² 包裝成份 KOD FX (1.0 U/μl) 200 μl × 1 2× PCR Buffer for KOD FX 1.7 ml × 3 2 mM dNTPs 1 ml × 2			² 建議模板濃度 Genomic DNA ≤200 ng / 50 μl Plasmid DNA ≤50 ng / 50 μl cDNA ≤200 ng （RNA equiv.) / 50 μl Crude sample ≤0.5-4 μl/ 50 μl
使用注意事項 1. 酵素以抗體抑制活性，Cycling 前須以 94℃ 加熱 2 分鐘以活化酵素活性 2. KOD 系列酵素最適反應溫度為 68℃，denature 溫度最高可達 98℃ 10 sec, 30 cycles 3. RT-PCR 反應時，過量的 RNA 會抑制酵素活性，建議 RNA 量不要高過 200 ng/50 ml 4. 可添加 DMSO 以增加高 GC 值模版之放大效率，濃度 2%-5% 不會影響酵素校正能力 5. PCR 產物為平端 (blunting end)，TA cloning 前須以 Taq 做 A-tailing。推薦使用 KOD -Plus- 專用之TA cloning kit (TArget clone, TY-TAK-201) 6. PCR buffer 於 -20℃ 保存不會凍結，反覆凍溶不會影響產品效能。 7. 針對大片段目標基因 (>10 kb)，primer Tm 值須大於 65℃，建議使用 25-35 mer 經 HPLC 純化之 primer 為宜。

操作實例

1. 各種組織、菌落樣品，不須經純化步驟，粗萃取物可以直接操作 PCR

動物培養細胞、血液、細菌、酵母及蕈類樣品，不須萃取純化或酵素裂解，可直接取樣做 PCR。

動植物組織經研磨、強鹼裂解或蛋白質酶處理後取其粗萃液進行 PCR。

2. Amplification of high GC targets

針對目標基因 Human IGF2R (GC content 90%, 8.9 kb)，僅 KOD FX 能成功放大

1, KOD FX; 2-6, 它牌 Taq based enzyme

3. Amplification from mouse tail lysates

4. Genotyping from mouse tail lysates

KOD FX 可以成功由鼠尾裂解液中放大 3.1 kb 標記基因，省去繁複萃取步驟篩選轉殖鼠快速又簡易。

5. Direct amplification from yeast & fungus colonies

直接以 tip 尖端取樣少量菌株，樣品能直接進行 PCR

6. Amplification from leaf samples

各種植物包括番茄葉、菸草葉、稻米葉、稻米顆粒，經研磨處理後，溶出液直接操作 PCR，KOD FX 可以成功放大 1.3 kb 之基因片段。

提高 PCR 成功率，挑戰更長放大片段

l KOD FX Neo 含專利配方強化延伸能力，human gDNA 放大片段可達 40 kb

l 增強的 PCR 效率，可以縮短放大時間為 30 sec/kb，
放大 40 kb 片段時反應時間可縮短10 小時。

l 克服 GC rich template
輕鬆完成 90% GC rich PCR 放大

l Direct PCR 成功率提高
crude sample、mouse tail lysate 不需萃取純化，可以直接進行 PCR 放大

l 校正能力約為 Taq 之 11 倍

訂購資訊

品號	品名	規格	最大放大片段	典型應用實驗
TY-KFX-201	KOD FX Neo	200U	40 kb	適用 GC-rich template (~90%)、可以克服最困難的 PCR 反應、最高 PCR 成功率可做長片段 PCR 放大 Crude sample 可以直接進行 PCR 反應正確率為 Taq 的 11 倍放大長度加長為 40 kb (human gDNA) 延長時間可縮短為 30 sec/kb
² 包裝成份 KOD FX Neo (1.0 U/μl) * 200 μl × 1 2× PCR Buffer for KOD FX Neo 1.7 ml × 3 2 mM dNTPs 1 ml × 2			² 建議模板濃度 Genomic DNA ≤200 ng / 50 μl Plasmid DNA ≤50 ng / 50 μl cDNA ≤200 ng （RNA equiv.) / 50 μl Crude sample ≤0.5–2 μl/50 μl
使用注意事項 1. 酵素以抗體抑制活性，Cycling 前須以 94℃ 加熱 2 分鐘以活化酵素活性 2. KOD 系列酵素最適反應溫度為 68℃，denature 溫度最高可達 98℃ 10 sec, 30 cycles 3. RT-PCR 反應時，過量的 RNA 會抑制酵素活性，建議 RNA 量不要高過 200 ng/50 ml 4. 可添加 DMSO 以增加高 GC 值模版之放大效率，濃度 2%-5% 不會影響酵素校正能力 5. PCR 產物為平端 (blunting end)，TA cloning 前須以 Taq 做 A-tailing。推薦使用 KOD -Plus- 專用之TA cloning kit (TArget clone, TY-TAK-201) 6. PCR buffer 於 -20℃ 保存不會凍結，反覆凍溶不會影響產品效能。 7. 針對大片段目標基因 (>10 kb)，primer Tm 值須大於 65℃，建議使用 25-35 mer 經 HPLC 純化之 primer 為宜。